中国农业大学动物医学院， 北京 海淀 100094
摘要： 本研究用酶联免疫吸附试验（ELISA）对采集自北京地区的94份奶牛血清（随机采集）和河北地区的55份奶牛血清（有流产史奶牛），进行Neospora caninum血清抗体检测。结果发现，北京地区随机采集的奶牛血清N.caninum抗体阳性率为18.1%（17/94），河北地区有流产史的奶牛N.caninum血清抗体阳性率为23.6%（13/55）。采用牛奶记录体系（DHI）对北京地区17头N.caninum血清抗体阳性牛进行了日产奶量、乳中蛋白率和乳脂率的测定，并与同群牛中134头阴性牛比较。结果表明，N.caninum血清抗体阳性牛日产奶量比阴性牛降低9.7%,乳中蛋白率和乳脂率分别降低20%和15.4%。初步证明N.caninum血清抗体阳性奶牛产奶量降低及奶品质的下降。对不同N.caninum抗体滴度阳性牛的泌乳期主要生产性能比较发现，其生产性能的变化与抗体滴度无明显相关性。
关键词： 新孢子虫； 流行病学； 奶牛； 生产性能
犬新孢子虫(Neospora caninum)的终末宿主是犬，牛、绵羊、山羊、犬、马、鹿、小鼠等均可作为中间宿主。奶牛新孢子虫病对牛危害很大，主要造成孕畜流产、死胎以及新生儿的运动神经系统疾病。在新生儿的肌肉、脑组织、呼吸道分泌物、皮肤脓包等活组织中均可检查到新孢子虫。
奶牛新孢子虫病的血清学检测最常用的方法是酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接荧光抗体试验（IFAT），其中ELISA方法是检测奶牛N.caninum抗体有效的方法。本试验分别应用IDEXX公司生产的N.caninum Antiboby Test Kit对北京地区某奶牛场随机采集的94份血清和瑞典Svanova公司生产的N.caninum Antiboby Iscom ELISA Test Kit对采自河北地区的具有流产史奶牛的55份血清进行N.caninum抗体检测，以了解上述地区奶牛新孢子虫的感染情况。同时采用牛奶记录体系（DHI）进行北京地区N.caninum抗体阳性牛与阴性牛的生产性状比较对N.caninum抗体阳性牛与N.caninum抗体阴性牛在主要生产性状方面（包括日产奶量、乳脂率和乳蛋白率）进行了比较分析，旨在了解新孢子虫感染对奶牛产奶量和奶品质量的影响。
1 材料与方法
1.1 被检血清2003年7～11月随机采集北京地区某奶牛场奶牛血清94份；2003年12月至2004年4月采自河北地区某奶牛场具有流产史的奶牛血清55份，由河北农业大学秦建华教授提供；所有血清分离后
1.2 主要试剂 N.caninum Antiboby Test Kit，IDEXX公司产品；N.caninum Antiboby Iscom ELISA Test Kit，瑞典Svanova公司产品。奶牛生产性能分析（DHI）检测试剂：（１）溶液A（1% Triton X100）2 ml Triton X100加入到200 ml去离子水中（
1.3 ELISA检测奶牛血清中N.caninum抗体 分别按IDEXX公司和Svanova公司的试盒剂操作说明进行。
1.4 DHI试验方法 (1)对测试的每头奶牛在产后第2个月收集乳汁。每天3次进行挤奶，早、中、晚采样比例为4∶3∶3。每次采样量为40 ml，加入0.4 ml防腐剂。取样后放在阴凉干燥处，标明场名、牛只号、采样时间等。(2)采用MILKOSCAN 300红外线牛奶分析仪对奶样进行乳脂率和乳蛋白率成分分析。样本分析标准采用加拿大样本质量管理标准进行（每个月对仪器进行校准，使乳成分误差不大于0.03%。如果测试奶样的乳脂率不在2%~7%，乳蛋白率不在2%~5%范围之内的需重检）。(3)奶成分测定仪测定的结果进入计算机经过牛群管理软件和SAS统计软件进行数据整理，形成DHI报告。进行DHI数据分析。
2 结果
2.1 北京地区某牛场ELISA检测结果 94份血清样本中17份血清N.caninum抗体呈阳性，被检奶牛的血清阳性率为18.1%。
2．2 河北地区某牛场ELISA检测结果 55份血清样本中13份血清N.caninum抗体呈阳性，被检奶牛的血清阳性率为23.6%。
2．3 北京地区阳性奶牛乳成分分析 我们对北京地区奶牛新孢子虫病流行病学调查的奶牛场进行DHI分析，N.caninum抗体阳性奶牛与抗体阴性奶牛在日产奶量、乳蛋白率、乳脂率均有较大差别。N.caninum抗体阳性奶牛泌乳第二个月日产奶量、乳蛋白率、乳脂率测定结果见表1（血清抗体阴性奶牛的生产性能只列出平均值）。
2．4 阳性牛与阴性牛泌乳期主要生产性能比较 结果见表2。
统计显示，N.caninum血清阳性牛与血清阴性牛泌乳期的产奶量差异不显著，而二者之间的乳脂率和乳蛋白率的差异显著。
2．5 不同抗体浓度阳性牛泌乳期主要生产性能差异分析 用SAS分析软件对不同抗体浓度的N.caninum血清阳性牛泌乳期主要生产性能作新复极差多重比较，结果见表3。
表2 血清N.caninum抗体阳性牛与阴性牛日产奶量及乳成分比较
日产奶量(kg) 乳脂率(%) 乳蛋白率(%)
N.caninum抗体阳性奶牛 25.1 3.3 2.8
N.caninum抗体阴性奶牛（平均值） 27.8 3.9 3.5
阳性比阴性牛减少值的百分比（%） 9.7 15.4 20.0
表3 不同抗体浓度的N.caninum血清阳性牛泌乳期
主要生产性能差异分析
N.caninum血清抗体浓度〖〗日产奶量（kg） 乳脂率(%) 乳蛋白率(%)
1∶128
1∶64 25.3A 3.3B 2.8B
1∶32 23.6A 3.2B 2.7B
抗体阴性牛 27.8A 3.9A 3.5A
注：同列中不同大写字母表示根据Duncan氏新复极差法正极显著差异
结果表明，N.caninum血清抗体阳性牛泌乳期主要生产性能变化与抗体滴度无关。
3 分析与讨论
奶牛新孢子虫病呈世界性分布，目前已有70多个国家报道新孢子虫病的感染和流行，与我国大陆临近的韩国、日本等国家和我国台湾地区也都有报道。感染率从10%～40%不等，最高可达82%，严重危害养牛业的发展。调查显示：在美国42.5%的牛流产是由新孢子虫病引起的,英国12.5%的牛流产是由该病引起的，韩国19.5%的牛流产是由该病引起的，我国台湾地区牛血清N.caninum抗体阳性率高达44.9%。
我国对该病的认识较晚，刘群等（2003）首次报道了北京某奶牛场流产奶牛新孢子虫血清抗体阳性率为26.6%（2001年采集的血清），本研究对2003-2004年河北地区具有流产史的55份血清样本中有13份血清N.caninum抗体呈阳性,抗体阳性率为23.6%。2批被检血清的检测结果较为接近；而对北京地区2003年随机采集的奶牛血清检测，发现奶牛新孢子虫血清抗体阳性率高达18.1%,该阳性比例低于2001年的检测结果，但由于该2次采集的样品不是同一个牛场，所以抗体阳性率的差异的原因是多方面的，还有待于进一步研究。而且，我们目前所检测的奶牛范围较小，还不能代表我国奶牛新孢子虫的感染情况，新孢子虫病在全国各地的流行还有待于进一步的调查和研究。
DHI（Dairy Herd Improvement）为奶牛场牛群改良计划，也称牛奶记录体系，世界上奶牛业发达的国家如加拿大、美国、荷兰、日本、瑞典等都使用DHI〖JP1〗来指导生产。本研究在对N.caninum血清抗体检测后进行的DHI数据统计发现：N.caninum抗体阳性奶牛日产奶量比抗体阴性牛平均减少
有关奶牛感染N.caninum与生产性能的关系研究很少，所以在不同的试验中得到的结果差异很大，至今还没有一致的结果。但奶牛感染N.caninum后对生产性能（泌乳能力、繁殖能力）的影响已为各国科学家所公认。本研究结果还显示，奶牛血清中新孢子虫的抗体滴度高低与生产性能之间无明显相关性，此结果尚未见于其他报道。
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